破伤风毒蛋白（载体蛋白）纯化应用案例
简介
多糖结合疫苗的研究起始于上世纪，研究者发现b型流感嗜血杆菌（Hib）和脑膜炎球菌C的荚膜多糖疫苗在免疫幼儿时未能诱导保护性抗体，而Goebel和Avery又于1929年首次证明，通过将多糖与蛋白质载体结合，可以增强纯化的3型肺炎链球菌多糖在兔体内的免疫原性，因此从20世纪70年代中期开始世界范围内陆陆续续的开始研制多糖蛋白结合疫苗。
随着疫苗安全性和有效性要求的提高，亚单位疫苗例如无细胞百日咳疫苗以及多糖结合疫苗例如肺炎多糖结合疫苗成为发展趋势。其中蛋白作为重要的有效成分，不但充当抗原成分还作为多糖载体参与引发免疫保护的过程。但结合疫苗在发展中也面临着一些问题，结合疫苗较昂贵的价格，限制了他在发展中国家的实用。因此高效的纯化工艺和降低结合疫苗成本成为这类疫苗上市推进的重要因素。
纯化工艺
目前应用于结合疫苗的载体蛋白质载体有四种：破伤风类毒素（TTd）、白喉类病毒（DTd）、白喉毒素（CRM197）、B群脑膜炎球菌外模蛋白复合体（OMPC）。
运用两步层析法纯化破伤风类病毒载体蛋白。替代了原有的三步纯化方法，在原有的基础上不但提高了纯度及回收率，而且也为放大生产节约了成本。
原工艺流程：发酵液后滤液、加入一定浓度的硫酸铵进行混合、Capto phenyl、收集目标峰、G25脱盐、Capto、DEAE、收集目标峰。
现用UniGel 80Q 、收集目标峰、加入一定浓度的硫酸铵进行混合、 UniHR Phenyl 30L、收集目标峰。
结果
原生产工艺三步层析后，纯度：98%、收率：60%。现使用UniGe®-80Q 、Uni®HR Phenyl 30L 两步层析后，最终达到纯度：98.3%，收率90%。不但满足以上纯化所需的所有属性要求，也提高收率的同时也缩短了33%生产时间、降低了60%的生产成本。
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