蛋白质纯化策略及影响因素
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- 发布时间：2022-05-16 16:37
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在进行蛋白质纯化之前，应该对蛋白质进行研究，包括其性质、敏感性，如其溶解性、对高盐或pH的敏感性、易氧化等。
蛋白质纯化策略及影响因素
在进行蛋白质纯化之前，应该对蛋白质进行研究，包括其性质、敏感性，如其溶解性、对高盐或pH的敏感性、易氧化等。
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今天分享一些蛋白质纯化过程中应该考虑的因素。
1.在进行蛋白质纯化之前，应该对蛋白质进行研究，包括其性质、敏感性，如其溶解性、对高盐或pH的敏感性、易氧化等。
2.需要考虑使用蛋白来决定蛋白制备的量级，这取决于色谱柱的大小，得到的蛋白的浓度，是否需要保持其活性，避免不必要的污染物;
3.蛋白质的检测方法。对于含有不同成分的蛋白质溶液，检测方法通常是不同的。考虑到其灵敏度、精密度和准确度，在不同的净化步骤中应选择不同的检测方法。
4.蛋白质缓冲添加剂，为了提高蛋白质的稳定性，防止微生物生长，降低冰点或保持蛋白质活性等，通常可以加入各种表面活性剂、金属螯合剂、蛋白酶抑制剂、防腐剂、还原剂等缓冲成分;
5.蛋白质的储存条件，在保证活性的前提下，其适合温度，能否冷冻，反复冷冻解冻，储存容器等。
蛋白质纯化之前需要研究序列信息，通过软件分析可以间接获得蛋白质的一些基本信息属性。在表达过程中，选择细菌、真菌还是动物细胞系统比较好，表达后是否保证正确的翻译和修饰，克隆时哪个标签更容易过量表达和纯化。采用何种工艺对表达的提取物进行细胞破碎，破碎过程中是否会引起蛋白质变性、结构变化、降解和稳定性变化等。蛋白质纯化过程，如盐析、有机溶剂沉淀、或离心、电泳、层析柱等方法，通过粗提、再纯化、期间的纯化顺序直至大规模生产。
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