蛋白质纯化的原则
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- 发布时间：2022-03-30 11:40
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蛋白质纯化体系用于蛋白质的分离纯化，蛋白质的分离纯化在生化研究和应用中应用广泛，是一项重要的操作技术。一个典型真核细胞可以包含数千种不同的蛋白质，其中一些是丰富的，而一些仅含有几个拷贝。为了研究某种蛋白质，我们必须首先从其他蛋白质和非蛋白质分子中纯化该蛋白质。
蛋白质纯化的原则
蛋白质纯化体系用于蛋白质的分离纯化，蛋白质的分离纯化在生化研究和应用中应用广泛，是一项重要的操作技术。一个典型真核细胞可以包含数千种不同的蛋白质，其中一些是丰富的，而一些仅含有几个拷贝。为了研究某种蛋白质，我们必须首先从其他蛋白质和非蛋白质分子中纯化该蛋白质。
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蛋白质纯化体系用于蛋白质的分离纯化，蛋白质的分离纯化在生化研究和应用中应用广泛，是一项重要的操作技术。一个典型真核细胞可以包含数千种不同的蛋白质，其中一些是丰富的，而一些仅含有几个拷贝。为了研究某种蛋白质，我们必须首先从其他蛋白质和非蛋白质分子中纯化该蛋白质。
原则
蛋白质纯化利用不同蛋白质之间固有的相似性和差异性，利用各种蛋白质之间的相似性去除非蛋白质物质的污染，利用蛋白质的差异性将目标蛋白质从其他蛋白质中纯化出来。每种蛋白质在大小、形状、电荷、疏水性、溶解性和生物活性方面都有差异。利用这些差异，可以从混合物如大肠杆菌裂解物中提取蛋白质，从而获得重组蛋白质。
粗分离和精纯化阶段是蛋白质纯化主要的两个阶段。蛋白质纯化通常采用树脂法进行。
粗分离阶段主要是将目的蛋白与DNA、RNA等其他细胞成分分离，因为此时模板体积比较大，成分比较杂，所以使用的树脂要满足粒径分布宽、颗粒大、流速高、容量大的特点，能够快速将蛋白与污染物分离。如果需要，可以加入相应的保护剂如蛋白酶YZ试剂以避免目标蛋白的降解。
在纯化阶段，需要更高的分辨率。在这个阶段，需要将目标蛋白与那些具有相似分子量和理化性质的蛋白区分开来。为了提高分辨率，需要更小的树脂颗粒。经常使用离子交换柱和疏水柱，应用时需要综合考虑树脂的选择性和柱效。
蛋白质纯化
蛋白质的物理、化学、生物化学、物理化学和生物学性质取决于其一级、二级、三级和四级结构。不同的蛋白质之间在性质上有差异或者改变条件是使它们有差异。同时利用多种性质的差异，考虑到产量和纯度，选择了蛋白质纯化方法。
蛋白质通常以复杂混合物的形式存在于组织或细胞中，每种类型的细胞中存在成千上万种不同的蛋白质。分离纯化蛋白质是非常艰巨和繁重的。到目前为止，还不可能用一套或一种现成的方法从复杂的混合物中提取任何一种。
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